Estrategia integral para cromatografía líquida de alta resolución: desde los principios hasta las precauciones operativas

Cromatografía líquida de alta resolución

La cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) es una técnica analítica que utiliza líquido como fase móvil. Bombea un disolvente único o una mezcla de disolventes, tampón y otras fases móviles a través de un sistema de infusión de alta presión hacia una columna cromatográfica, que contiene una fase estacionaria. Dentro de la columna cromatográfica, los componentes de la muestra se separan eficazmente debido a diferentes fuerzas de interacción con la fase estacionaria y la fase móvil. Posteriormente, estos componentes separados ingresan al detector para un análisis detallado, logrando así un análisis integral de la muestra.

El principio se basa en la diferencia en la relación de distribución de la mezcla entre líquido-sólido o dos líquidos inmiscibles. Este método es particularmente adecuado para el análisis de sustancias con puntos de ebullición elevados, difíciles de vaporizar, térmicamente inestables y biológicamente activas. Al mismo tiempo, la cromatografía líquida de alta resolución también ha mostrado un uso generalizado en el análisis quiral, proporcionando un importante apoyo técnico para la investigación en los campos de la química, la biología y la medicina.

Pasos operativos de la cromatografía líquida de alta resolución.

Arranque del equipo: Primero, encienda los interruptores de encendido de la computadora y del cromatógrafo por turno para iniciar el instrumento.

Iniciar sesión en la estación de trabajo: inicie sesión en la estación de trabajo de cromatografía líquida para prepararse para operaciones posteriores.

Configuración y configuración de parámetros: después de seleccionar la configuración del instrumento, realice los ajustes de parámetros necesarios, como la relación de fase móvil, la sensibilidad del detector, etc.

Autoprueba del instrumento y establecimiento del método: Inicie la autoprueba del instrumento para asegurarse de que esté en buenas condiciones. Después de pasar la autoprueba, establezca los métodos correspondientes según los requisitos experimentales.

Equilibrio del sistema: antes de comenzar la recopilación de datos, asegúrese de que el sistema esté funcionando en las condiciones establecidas durante un período de tiempo para lograr un estado equilibrado.

Recopilación de datos: cuando la línea de base sea estable, realice una inyección manual. Haga clic en el icono Inicio en la interfaz de recopilación de datos para comenzar a recopilar datos. Después de la recolección, guarde el archivo de cromatografía.

Análisis de datos y salida de informes: seleccione la función de análisis de datos en la interfaz principal y abra el archivo de cromatografía para su procesamiento y análisis. Una vez completado el análisis, se genera el informe y finaliza la prueba.

Apagado y limpieza: Antes de apagar, dejar funcionar la máquina durante el tiempo suficiente y lavar completamente la columna con fase móvil para asegurarse de que no queden residuos antes de apagar la máquina.

Precauciones al utilizar la cromatografía líquida.

Operación segura: Evite siempre el contacto directo de sus manos con la aguja y las áreas que puedan entrar en contacto con la muestra para garantizar la seguridad personal y la limpieza del instrumento.

Operación de lavado de la aguja: Antes de aspirar una muestra, se debe lavar cuidadosamente la aguja con etanol o metanol para eliminar posibles impurezas o residuos.

Elimine las burbujas de aire: durante el proceso de muestreo de la jeringa, asegúrese de que no se mezclen burbujas de aire. Las burbujas de aire se pueden eliminar apuntando la aguja hacia arriba y moviendo el tubo de la aguja mientras se mantiene la velocidad de succión adecuada.

Velocidad y profundidad de inserción: la inserción debe ser rápida y estable para garantizar que la velocidad y la profundidad de cada inyección de muestra sigan siendo constantes, lo cual es la clave para garantizar la precisión de los resultados del análisis.

Inyección de muestra: cuando la punta de la aguja se inserta en la cámara de vaporización hasta el centro, se debe iniciar la inyección de muestra para garantizar que la muestra pueda vaporizarse completamente y analizarse de manera efectiva.

Verifique si hay fugas de aire: si se descubre que la presión de la cámara de gasificación cae, la forma del pico disminuye o el ancho aumenta, puede deberse a una fuga de aire. En este momento, el anillo de sellado se debe reemplazar a tiempo para restablecer el funcionamiento normal del instrumento.

Clasificación de las agujas de inyección: Las agujas de inyección de los cromatógrafos de gases y líquidos no se pueden mezclar. Los cromatógrafos de gases utilizan agujas puntiagudas, mientras que los cromatógrafos de líquidos utilizan agujas planas. La mezcla puede causar daños al instrumento o resultados analíticos inexactos.

Estabilidad de los parámetros: durante el proceso de prueba, se debe mantener la estabilidad de los parámetros del instrumento y se deben evitar los parámetros a voluntad para garantizar la precisión de los resultados del análisis.

Seguridad de los datos: no utilice su propia unidad flash USB para copiar datos para garantizar la seguridad e integridad de los datos.